血清保存與解凍
發(fā)布時(shí)間:2020-12-07 07:50:55 點(diǎn)擊:
保存血清最好的方法? 我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃至–70℃低溫冰箱中。然而,若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?br />
如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?我們建議您采用逐步解凍法:將-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清取出后先置于2℃-8℃冰箱中使之融解,然后移入室溫待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需輕輕規(guī)則地?fù)u晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
盡量避免沉淀物的產(chǎn)生的方法:①解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),非常容易產(chǎn)生沉淀物。
②解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
③請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
④血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無(wú)須做此步驟。
⑤若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成的,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。
血清是否一定要滅活?經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。
經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是
“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤認(rèn)為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此建議若非必須,可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái),不但節(jié)省寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!