透射電鏡（TEM）通過(guò)對(duì)組織細(xì)胞樣本進(jìn)行樹脂包埋切片，60-80nm厚度的超薄切片，經(jīng)過(guò)重金屬鉛、鈾染色后于透射電子顯微鏡中進(jìn)行幾千至幾萬(wàn)倍的放大成像，從而能夠清楚的觀察到在普通光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看清的動(dòng)植物細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)，比如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、自噬小體、凋亡小體、葉綠體、液泡、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌或病毒侵染等結(jié)構(gòu)及病理變化。透射電鏡超薄切片除了能夠顯示細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)之外，還可用于觀察病原微生物，如各類細(xì)菌真菌等。目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)、分子生物學(xué)、材料科學(xué)等諸多研究領(lǐng)域，是觀察和研究物質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的強(qiáng)有力工具。

實(shí)驗(yàn)流程：包埋-制片-拍照

透射電鏡樣本準(zhǔn)備方法及要求：
 
以下所有樣本必須盡量新鮮，固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰！
 
1、動(dòng)物組織樣本
①1-3min內(nèi)取樣，取樣組織2mmX2mm大小，盡量薄。如來(lái)不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時(shí)左右待組織變硬以后再修整組織進(jìn)行后固定。超出此范圍后組織會(huì)無(wú)法完全固定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)無(wú)法完成，務(wù)必請(qǐng)重視此過(guò)程
②取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位（如觀察腎小球取腎皮質(zhì)；觀察胰島取胰島豐富的胰尾；皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定）。
③取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時(shí)樣本可保存1個(gè)月左右
2、植物組織樣本

1. 取材要求同動(dòng)物組織樣本。
2. 組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底，如無(wú)條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi)，組織不能漂浮在固定液表面。

3、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：
方法一：
①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入2.5%的常溫戊二醛固定液。
②常溫固定5min左右，用細(xì)胞刮（或軟橡膠蓋切得平整小方塊）沿一個(gè)方向輕輕刮下細(xì)胞，切記不要反復(fù)刮，避免細(xì)胞刮破。
③用巴氏吸管把細(xì)胞液吸入離心管內(nèi)，放入離心機(jī)（不超過(guò)3000轉(zhuǎn)），離心2min左右，細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。
④棄固定液后加新的電鏡固定液，把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起，懸浮于固定液中。
⑥室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
方法二：（對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒有要求的）
①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入胰酶。
②胰酶消化好后（時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)），用培養(yǎng)基終止消化，用吸管把細(xì)胞吹下來(lái)。吸入離心管，離心（不超過(guò)3000轉(zhuǎn)），2min左右，細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。
③棄上清，加入2.5%的常溫戊二醛固定液，把細(xì)胞團(tuán)輕輕挑起，懸浮于固定液中。
④室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
4、細(xì)菌樣本
長(zhǎng)于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌：連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存， 4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
 
懸浮細(xì)菌孢子等：離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
5、病毒
破碎組織細(xì)胞，粗離心去除細(xì)胞碎片取上清，超速離心分離出病毒（病毒提取的過(guò)程需要客戶自己完成）。用緩沖液（如PBS）懸浮病毒，遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸，近距離4°保存運(yùn)輸，盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。
6、外秘體囊泡等
客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集，用緩沖液（如PBS）或者試劑盒中的保存液懸浮，遠(yuǎn)距離-80°凍存運(yùn)輸，近距離4°保存運(yùn)輸，盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。（因此類樣品極易降解，樣品越新鮮越好，最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染，否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到）
7、納米材料等無(wú)機(jī)材料
直接準(zhǔn)備粉劑或用緩沖液（如PBS）懸浮，常溫保存運(yùn)輸即可（需要超聲的備注）。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。

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